ГОСТ 16446-78 Комплемент сухой для реакции связывания комплемента. Технические условия
Текст ГОСТ 16446-78 Комплемент сухой для реакции связывания комплемента. Технические условия
КОМПЛЕМЕНТ СУХОЙ ДЛЯ РЕАКЦИИ СВЯЗЫВАНИЯ КОМПЛЕМЕНТА
ГОСТ 16446-78
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СТАНДАРТОВ СОВЕТА МИНИСТРОВ СССР Москва
РАЗРАБОТАН Всесоюзным государственным научно-контрольным институтом ветеринарных препаратов
Директор Д. Ф. Осидзе Руководитель темы Л. Н. Шаров
Исполнители: А. Н. Шаров, А. М. Силаев, М. К. Шевченко, Я. Я. Телишев ская, А. А. Гринев, М. X. Демченко
ВНЕСЕН Министерством сельского хозяйства СССР
Член Коллегии А. Д. Третьяков
ПОДГОТОВЛЕН К УТВЕРЖДЕНИЮ Всесоюзным научно-исследовательским институтом стандартизации (ВНИИС)
Директор А. В. Гличев
УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Государственного комитета стандартов Совета Министров СССР от 9 марта 1978 г. N9 635
УДК 612.398.12 : 619 : 006.3 54 Группа Р31
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ СОЮЗА ССР
КОМПЛЕМЕНТ СУХОЙ ДЛЯ РЕАКЦИИ СВЯЗЫВАНИЯ КОМПЛЕМЕНТА Технические условия
Lyophilizated compliment for the compliment fixation
Постановлением Государственного комитета стандартов Совета Министров СССР •т 9 марта 1978 г. № 635 срок действия установлен
с 01.01.1979 г. до 01.01,1984 г.
Несоблюдение стандарта преследуется по закону
Настоящий стандарт распространяется на сухой комплемент, представляющий собой сыворотку крови морских свинок, стабилизированную сернокислым магнием и высушенную методом лио-филизации.
Сухой комплемент предназначен для применения в качестве компонента реакции связывания комплемента (РСК) в ветеринарии.
1. ТЕХНИЧЕСКИЕ ТРЕБОВАНИЯ
1.1. Сухой комплемент для реакции связывания комплемента готовят в соответствии с требованиями настоящего стандарта по технологическим правилам, утвержденным в установленном порядке.
1.2. По физико-химическим и биологическим свойствам сухой комплемент для РСК должен соответствовать требованиям и нормам, указанным в табл. 1.
Издание официальное Перепечатка воспрещена
©Издательство стандартов, 1978
Характеристика и норма
Пористая однородная масса белого или розового цвета, без плесени и посторонней примеси
Растворимость препарата и прозрачность раствора
При добавлении в ампулу (флакон) физиологического раствора или дистиллированной воды в объеме, указанном на ампуле (флаконе), должен полностью раствориться в течение 2—3 мин. Раствор прозрачный, слегка опалесцирующий, желтовато-розового цвета
Массовая доля сернокислого магния, %
Влажность, %, не более
Не должен вызывать гемолиза эритроцитов барана в отсутствии гемолизина
Активность (титр) в гемолитической системе в разведении 1 20, не ниже
2. ПРАВИЛА ПРИЕМКИ
2.1. Сухой комплемент для РСК принимают сериями. Под серией следует понимать определенное количество препарата, изготовленное в результате одноразового (одновременного) смешивания в одной емкости исходного сырья, разлитое в течение одного рабочего дня по ампулам (флаконам), замороженное и высушенное в одном или нескольких сушильных вакуум-аппаратах при одном и том же режиме, получившее свой номер и оформленное одним документом о качестве.
2.2. Каждая серия сухого комплемента для РСК должна быть принята на предприятии-изготовителе государственным контролером Всесоюзного государственного научно-контрольного института ветеринарных препаратов Министерства сельского хозяйства СССР.
2.3. Для контроля качества сухого комплемента от каждой серии отбирают 40 ампул (флаконов).
2.4. При получении неудовлетворительных результатов хотя бы по одному из показателей по нему проводят повторные испытания на удвоенном количестве ампул (флаконов), отобранных от той же серии сухого комплемента.
Результаты повторных испытаний распространяют на всю серию.
2.5. Контроль качества определенной серии сухого комплемента по требованию потребителя проводит государственный контролер на предприятии-изготовителе или Всесоюзный государственный научно-контрольный институт ветеринарных препаратов Министерства сельского хозяйства СССР.
3. МЕТОДЫ ИСПЫТАНИЯ
3.L Метод отбора проб
3.1 Л. Ампулы (флаконы) отбирают из разных мест упаковки. 20 ампул (флаконов) используют для испытаний, а 20 ампул (флаконов) хранят в архиве государственного контролера.
3.2. Для определения внешнего вида, цвета, однородности, наличия или отсутствия посторонней примеси, плесени или изменения консистенции ампулы (флаконы) с сухим комплементом встряхивают и просматривают.
3.3. Для определения растворимости препарата и прозрачности раствора в ампулу (флакон) с сухим комплементом при помощи пипетки или шприца вливают физиологический раствор или дистиллированную воду в количестве, указанном на ампуле (флаконе). После встряхивания препарат должен полностью раствориться в течение 2—3 мин. Прозрачность раствора определяют визуально в проходящем свете при периодическом встряхивании.
3.4. Определение массовой доли сернокислого магния
3.4.1. Оборудование и реактивы
Для проведения испытания применяют:
колбы мерные вместимостью 100, 250 и 1000 мл по ГОСТ 1770—74;
колбы плоскодонные вместимостью 200 мл, стаканы лабораторные по ГОСТ 10394—72;
воду дистиллированную по ГОСТ 6709-—72;
аммиачный буферный раствор;
трилон Б, 0,1 н. раствор;
хромовые индикаторы: кислотный хром темно-синий или хромовый черный специальный;
фиксанал MgS04-7H20—0,01 г-экв или MgS04-7H20 по ГОСТ 4523—77, х. ч., ч. д. а.
3.4.2. Подготовка к испытанию
3.4.2.1. Приготовление аммиачного буферного раствора.
Берут 2 г хлористого аммония и растворяют в дистиллированной воде, добавляют 10 мл 25%-ного водного раствора аммиака и доводят объем дистиллированной водой до 100 мл.
3.4.2.2. Приготовление растворов хромовых индикаторов.
0,5 г индикатора растворяют в 20 мл аммиачного буферного
раствора и доводят до 100 мл этиловым спиртом.
3.4.2.3. Приготовление 0,1 н. раствора трилона Б.
Берут навеску 18,6 г трилона Б, растворяют в дистиллированной воде, доводят объем до 1 л, перемешивают и фильтруют, если раствор получился мутным.
3.4.2.4. Установка титра трилона Б.
Готовят 0,01 н. раствор соли магния: растворяют содержимое фиксанала MgS04-7H20 или навеску 1,2325 г MgS04*7H20 в 1 л дистиллированной воды. В колбу вместимостью 200 мл вносят 100 мл 0,01 н. раствора соли магния, 5 мл аммиачного буферного раствора, 5—7 капель индикатора, смесь медленно титруют при интенсивном перемешивании 0,1 н. раствором трилона Б до отчет ливого изменения цвета раствора.
Поправочный коэффициент к титру трилона Б (Ктр) вычисляют по формуле
где v — количество 0,1 н. раствора трилона Б, израсходованное на титрование 100 мл 0,01 н. раствора MgS04> мл;
Kyig — поправочный коэффициент к титру 0,01 н. раствора MgSO<.
3.4.3. Проведение испытания
Сухой комплемент из пяти ампул растворяют в дистиллированной воде, переносят в мерную колбу вместимостью 250 мл и доводят объем до метки. Затем берут 50 мл раствора, прибавляют к нему 5 мл аммиачного буферного раствора, 5—6 капель раствора хромового индикатора и титруют при энергичном перемешивании 0,1 н. раствором трилона Б до изменения цвета раствора.
3.4.4. Обработка результатов
Массовую долю сульфата магния в препарате (X) вычисляют по формуле-
_Y_ гуКтр-0,01232 100
где У] — количество 0,1 н. раствора трилона Б, израсходованное на титрование пробы, мл;
Ктр — поправочный коэффициент к титру 0,1 н. раствора трилона Б;
0,01232 — количество MgSCV7H20, соответствующее 1 мл 0,1 в раствора трилона Б, г;
2 — количество комплемента в ампуле, мл.
3.5. Определение влажности
3.5.1. Аппаратура, материалы и реактивы Для проведения испытания применяют: весы аналитические;
шкаф сушильный лабораторный на 105°С;
стаканчики для взвешивания с притертыми крышками (бюксы) по ГОСТ 7148—70 диаметром 2,5 см, высотой 3,5 см;
эксикатор по ГОСТ 6371—73.
3.5.2. Проведение испытания
В высушенную до постоянной массы бюксу помещают содержимое одной ампулы сухого комплемента (вскрытие ампул и перенос вещества в бюксу производят быстро в связи с большой гигроскопичностью материала). Бюксу с навеской взвешивают с погрешностью не более 0,0002 г. Пробу высушивают в сушильном шкафу при 100°С в течение 1 ч. Затем бюксу охлаждают в эксикаторе в течение 30 мин и снова взвешивают.
3.5.3. Обработка результатов
Влажность (A'i) в процентах вычисляют по формуле
где m — первоначальная масса навески сухого комплемента до высушивания, г;
тх — масса навески после высушивания, г.
За окончательный результат принимают среднее арифметическое результатов трех параллельных определений. Допускаемые расхождения между результатами параллельных определений не должны превышать 0,5%.
3.6. Определение активности (титра) и безвредности
Активность сухого комплемента определяют по полному (100%-ному) гемолизу эритроцитов в гемолитической системе.
Титром комплемента называют наименьшее его количество (наибольшее разведение), при котором в течение 10 мин при 37—38°С наступает полный гемолиз 0,5 мл 2,5%-ной взвеси эритроцитов барана в присутствии 0,5 мл гемолитической сыворотки, взятой в удвоенном титре по ГОСТ 16445—78, в общем объеме жидкости 2,5 мл.
Безвредность комплемента характеризуется полным отсутствием гемолиза эритроцитов барана в пробирке без гемолитической сыворотки.
3.6.1. Оборудование и реактивы.
Для проведения испытания применяют:
штативы для пробирок;
пробирки стеклянные по ГОСТ 10515—75;
флаконы вместимостью 250 мл;
колбы стеклянные вместимостью 50, 100 мл по ГОСТ
бусы стеклянные или металлические;
иглы для взятия крови;
пипетки мерные вместимостью 1, 2, 5 и 10 мл по ГОСТ 20292—74;
физиологический раствор хлористого натрия pH 6,8—7,2;
3.6.2. Подготовка к испытанию
3.6.2.1. Приготовление 2,5%-ной взвеси эритроцитов барана.
Кровь у барана берут утром, до кормления, из яремной вены, во флакон со стеклянными или металлическими бусами или без них. Встряхивают 7—10 мин, затем фильтруют через марлю, эритроциты 3—5 раз отмывают физиологическим раствором путем центрифугирования при 2500 об/мин до полного обесцвечивания промывной жидкости. Из осадка эритроцитов готовят 2,5%-ную взвесь на физиологическом растворе.
3.6.3. Проведение испытания
Комплемент в разведении 1:20 на физиологическом растворе разливают в ряд пробирок дозами, начиная с 0,1 до 0,4 мл, увеличивая дозу в каждой следующей пробирке на 0,03 мл (0,10; 0,13; 0,16 мл и т. д. табл. 2). Затем в пробирки доливают физиологический раствор до 0,5 мл общего объема жидкости (0,40; 0,37; 0,34 мл и т. д.). После этого в каждую пробирку вносят по 1 мл физиологического раствора, по 0,5 мл 2,5%-ной взвеси эритроцитов барана и по 0,5 мл гемолизина в удвоенном титре. Одновременно в штатив устанавливают три пробирки для контроля. В первую пробирку контроля вносят 0,4 мл комплемента в разведении 1:20, 0,5 мл 2,5%-ной взвеси эритроцитов барана и 1,6 мл физиологического раствора; во вторую пробирку вносят 0,5 мл 2,5%-ной взвеси эритроцитов барана, 0,5 мл гемолизина в удвоенном титре и 1,5 мл физиологического раствора; в третью пробирку— 0,5 мл 2,5%-ной взвеси эритроцитов барана и 2,0 мл физиологического раствора (табл. 2). Первая пробирка служит для контроля безвредности комплемента без гемолизина, вторая—для контроля гемолизина и третья — устанавливает наличие резистентности эритроцитов барана.
Штатив с пробирками встряхивают и помещают в водяную баню при 37—38°С на 10 мин.
3.6.4. Обработка результатов
Штатив с пробирками извлекают из бани и проводят учет реакций в проходящем свете. Комплемент считают активным при титре не ниже 0,31 и безвредным при отсутствии гемолиза эритроцитов в первой пробирке контроля.